ニトロセルロースを使用する際のヒントは何ですか?

硝酸セルロースは白いポリマーです。この物質は実際にはセルロースナイトレートなど多くの名前があり、英語の略称はNCです。この化学物質は、日光にさらされると簡単に色が変わったり、燃えやすいなど、多くの特徴があります。したがって、硝酸セルロースは実際には危険な物質です。使用する際には注意が必要です。次に、硝酸セルロースの正しい使用方法を紹介します。

ニトロセルロース膜の応用に関するヒント:

1. タンパク質膜結合の原理

タンパク質と膜の結合原理、既知の結合力には疎水力、水素結合の静電力などがあります。正確な結合原理は明らかではなく、主に仮説によってサポートされています。主な仮説は 2 つあります。

1) まず、両者は静電抵抗によって結合し、その後、水素結合と疎水効果を利用して長期的な結合を維持します。

2) まず、両者を疎水性相互作用によって結合させ、その後、静電効果を利用して長期的な結合を維持します。

どちらの仮説も、結合プロセスは最初の結合とその後の長期結合の 2 つのステップで構成されていることを示しています。結合の原理はあいまいであるため、この分野での作業は実際の経験に大きく依存しています。

2. 膜の結合への影響

1) 膜の孔径

技術者の中には、異なる膜を区別するために膜の孔径を使用する傾向がある人もいますが、これは同じメーカーの製品に限られることに注意してください。異なるメーカーの製品である場合、この比較は意味がありません。膜の孔径とクロマトグラフィー速度の関係は上記で説明しました。

膜の孔径が小さくなると、膜の実際の利用可能な表面積が増加し、膜に結合したタンパク質の量も増加します。表面積を推定するためのパラメータは、表面積比（実際の利用可能な表面積と使用される膜表面積の比）です。

さらに、膜の孔径が小さいほどクロマトグラフィーの速度が遅くなり、金標識複合体がTラインを通過するのにかかる時間が長くなり、反応がより完全になります。

上記の 2 つの点を組み合わせると、膜の孔径が小さいほど感度が高くなるという結論になります。ただし、同時に、プレートの走行速度が低下し、非特異的結合の可能性が高まり、つまり偽陽性が高くなります。したがって、テスト結果に応じて実際のプロジェクトに適した膜を選択し、適切なバランスを見つける必要があります。

2) メーカーによる膜の違い

この違いは主に次の 2 つの点から生じます。

1> 膜を製造する際、使用されるポリマーと界面活性剤の供給源、種類、量は異なります。同様に、これら 2 種類の物質は、一般的に膜処理のパフォーマンスに大きな影響を与えます。

2>処理工程が異なります。

3. 生物学的原料、試薬、緩衝液の配合

1) 生物学的原料。CT ラインに使用される生物学的原料は多岐にわたるため、ここでは簡単に説明します。

まず、モノクローナル抗体はポリクローナル抗体よりも膜によく結合します。これは主に、ポリクローナル抗体には多くの異なる表面部位があり、膜への各部位の最適な結合条件がわずかに異なるため、最適化の難易度が間違いなく高くなるためです。

第二に、分子量が大きいほど、タンパク質が固相物質に結合するのが難しくなります。

2) バッファ

おそらく誰もが最も関心を持っているのは、バッファー、ブロッキング溶液、その他の処理溶液配合を含む、優れた性能を持つ配合を得たいという願望でしょう。

実際には、普遍的な公式リストを提供することは不可能です。異なる反応システムには異なる公式が必要であり、異なる機関の反応システムは異なるためです。「魚」を捕まえたい場合は、まず「釣り」を学ばなければなりません。すべての人を誤解させないために、公式に関する次の質問はアイデアを提供するだけであり、具体的な公式は自分で調べてください。

緩衝液の構成は、一般的には、PBS（または他の緩衝システム）+作用物質（特定の問題用）+ PH調整です。さまざまな以前の資料を参照した後、私の個人的な意見は、配合原理は複雑ではなく単純であるべきであり、作用物質は必要に応じて追加する必要があるということです。膜製造技術の向上により、追加する必要のある元の作用物質の多くは不要になりました。

推奨される緩衝液システムは、さまざまな抗原や抗体に優れた適応性を持つ 0.01M PBS pH 7-7.2 です。

物質の性能に影響を与える主な要因は次のとおりです。

少量の NACL は信号強度を低下させ、誤検知を排除することができます。

有機アルコール（メタノール、イソプロパノールなど）は膜を濡らし、膜上の静電気を軽減し、コーティングの結合を促進します。膜製造プロセスが改善されているため、個人的にはお勧めしません。

界面活性剤 (TW20、TX100) は親水性を高め、中空線を防ぎ、色を強調します。

保護剤である砂糖は老化を遅らせ、上記のように親水性を高めることもできます。

pH を特定の位置に調整すると、偽陽性を排除できます。

4. サンプル環境

周囲の湿度はフィルム堆積プロセスにとって非常に重要です。最適な湿度は通常 45 ～ 65% です。

湿度が低すぎると、膜上に静電気が発生しやすくなり、膜上に散乱点が形成されやすくなり、テストで疎水性の斑点が発生します。

湿度が高すぎると、膜上の毛細管現象が強化され、CT ラインが広くなったり、拡散したりしやすくなります。

サンプルのスポッティング中に膜湿度の均一性を確保するために、通常、サンプルのスポッティング前に膜を一定期間湿度条件下に置いておきます。

5. スポッティング装置と膜表面状態の関係

現在、スポッティングには、スクラッチフィルムタイプと非接触スポッティングフィルムタイプの2つの方法があります。非接触スポッティングフィルムタイプはスクラッチフィルムタイプよりも優れており、輸入スクラッチフィルムタイプは国産スクラッチフィルムタイプよりも優れています。

膜スクラッチ法は、柔らかいチューブを使用して抗体を膜表面に引き寄せますが、膜自体は柔らかくもろいため、スクラッチチューブの表面に跡が残ります。輸入された膜スクラッチ機はより良い材料と制御システムを使用しているため、残る傷はより軽く、国産の機器は劣っているため、残る傷はより深刻です。傷はクロマトグラフィーの金標識複合体に対して抵抗を形成しやすく、偽陽性を引き起こします。同時に、プレートを走行させるときにTラインの位置に細い線（ゴーストライン）が現れ、プレートの走行が終了するとゴーストラインが消えるという奇妙な現象が発生しやすくなります。

6. 膜幅とスポッティング位置

膜の幅は通常 18mm (または 20mm) と 25mm で、それぞれテストストリップとテストプレートに使用されます。

ただし、T ラインのスポッティング位置が異なると、感度も異なります。スポッティング位置が上方に移動すると、T ライン位置を通過する金標識複合体の速度が遅くなり、反応時間が長くなり、感度が高くなります。逆に、感度は低下します。この方法を使用して、感度を変更し、偽陽性を排除できます。